Ռեկոմբինանտ սպիտակուց. արտադրության մեթոդներ և կիրառություններ

Բովանդակություն:

Ռեկոմբինանտ սպիտակուց. արտադրության մեթոդներ և կիրառություններ
Ռեկոմբինանտ սպիտակուց. արտադրության մեթոդներ և կիրառություններ
Anonim

Սպիտակուցը բոլոր օրգանիզմների կարևոր բաղադրիչն է: Նրա մոլեկուլներից յուրաքանչյուրը բաղկացած է մեկ կամ մի քանի պոլիպեպտիդային շղթայից՝ բաղկացած ամինաթթուներից։ Չնայած կյանքի համար անհրաժեշտ տեղեկատվությունը կոդավորված է ԴՆԹ-ում կամ ՌՆԹ-ում, ռեկոմբինանտ սպիտակուցները օրգանիզմներում կատարում են կենսաբանական գործառույթների լայն շրջանակ, ներառյալ ֆերմենտային կատալիզը, պաշտպանությունը, աջակցությունը, շարժումը և կարգավորումը: Ըստ օրգանիզմում իրենց ֆունկցիաների՝ այդ նյութերը կարելի է բաժանել տարբեր կատեգորիաների՝ հակամարմիններ, ֆերմենտներ, կառուցվածքային բաղադրիչ։ Հաշվի առնելով իրենց կարևոր գործառույթները՝ նման միացությունները ինտենսիվ ուսումնասիրվել և լայնորեն օգտագործվել են։

լաբորատոր արտահայտություն
լաբորատոր արտահայտություն

Նախկինում ռեկոմբինանտ սպիտակուց ստանալու հիմնական միջոցը այն բնական աղբյուրից մեկուսացնելն էր, որը սովորաբար անարդյունավետ է և ժամանակատար: Կենսաբանական մոլեկուլային տեխնոլոգիայի վերջին առաջընթացը հնարավորություն է տվել կլոնավորել ԴՆԹ-ն, որը կոդավորում է նյութերի որոշակի խումբ, արտահայտման վեկտորի մեջ այնպիսի նյութերի, ինչպիսիք են բակտերիաները, խմորիչները, միջատների բջիջները և կաթնասունների բջիջները::

Պարզ ասած՝ ռեկոմբինանտ սպիտակուցները էկզոգեն ԴՆԹ-ի արտադրանքի միջոցով թարգմանվում են.կենդանի բջիջներ. Դրանք ստանալը սովորաբար ներառում է երկու հիմնական քայլ.

  1. Մոլեկուլի կլոնավորում.
  2. Սպիտակուցային արտահայտություն.

Ներկայումս նման կառուցվածքի արտադրությունը բժշկության և կենսաբանության մեջ օգտագործվող ամենահզոր մեթոդներից է։ Կազմը լայն կիրառություն ունի հետազոտության և կենսատեխնոլոգիայի մեջ։

Բժշկական ուղղություն

Ռեկոմբինանտ սպիտակուցները կարևոր բուժում են տարբեր հիվանդությունների, ինչպիսիք են շաքարախտը, քաղցկեղը, վարակիչ հիվանդությունները, հեմոֆիլիան և անեմիան: Նման նյութերի բնորոշ ձևակերպումները ներառում են հակամարմիններ, հորմոններ, ինտերլեյկիններ, ֆերմենտներ և հակակոագուլանտներ: Թերապևտիկ օգտագործման համար ռեկոմբինանտ ձևակերպումների աճող կարիք կա: Նրանք թույլ են տալիս ընդլայնել բուժման մեթոդները։

գենետիկորեն մշակված ռեկոմբինանտ սպիտակուցները առանցքային դեր են խաղում թերապևտիկ դեղերի շուկայում: Կաթնասունների բջիջները ներկայումս արտադրում են ամենաթերապևտիկ նյութերը, քանի որ դրանց ձևակերպումները կարող են արտադրել բարձրորակ բնական նյութեր: Բացի այդ, E. coli-ում արտադրվում են բազմաթիվ հաստատված ռեկոմբինանտ թերապևտիկ սպիտակուցներ լավ գենետիկայի, արագ աճի և բարձր արտադրողականության շնորհիվ: Այն նաև դրական է ազդում այս նյութի վրա հիմնված դեղամիջոցների զարգացման վրա։

Հետազոտություն

Ռեկոմբինանտ սպիտակուցներ ստանալը հիմնված է տարբեր մեթոդների վրա: Նյութերը օգնում են պարզել մարմնի հիմնական և հիմնարար սկզբունքները: Այս մոլեկուլները կարող են օգտագործվել նույնականացնելու և որոշելու համարնյութի գտնվելու վայրը, որը կոդավորված է որոշակի գենով, և բացահայտել այլ գեների գործառույթը տարբեր բջջային գործունեության մեջ, ինչպիսիք են բջջային ազդանշանը, նյութափոխանակությունը, աճը, վերարտադրությունը և մահը, հոդվածում քննարկված միացությունների տառադարձումը, թարգմանությունը և փոփոխումը:

Ձեռք բերելու ժամանակակից մեթոդներ
Ձեռք բերելու ժամանակակից մեթոդներ

Այսպիսով, դիտարկված բաղադրությունը հաճախ օգտագործվում է մոլեկուլային կենսաբանության, բջջային կենսաբանության, կենսաքիմիայի, կառուցվածքային և կենսաֆիզիկական ուսումնասիրությունների և գիտության շատ այլ ոլորտներում: Միևնույն ժամանակ, ռեկոմբինանտ սպիտակուցներ ստանալը միջազգային պրակտիկա է։

Նման միացությունները օգտակար գործիքներ են միջբջջային փոխազդեցությունները հասկանալու համար: Նրանք ապացուցել են արդյունավետությունը մի քանի լաբորատոր մեթոդներում, ինչպիսիք են ELISA-ն և իմունոհիստոքիմիան (IHC): Ռեկոմբինանտ սպիտակուցները կարող են օգտագործվել ֆերմենտային անալիզներ մշակելու համար: Երբ օգտագործվում են զույգ համապատասխան հակամարմինների հետ համատեղ, բջիջները կարող են օգտագործվել որպես նոր տեխնոլոգիաների ստանդարտներ:

Կենսատեխնոլոգիա

Ամինաթթուների հաջորդականություն պարունակող ռեկոմբինանտ սպիտակուցներն օգտագործվում են նաև արդյունաբերության, սննդի արտադրության, գյուղատնտեսության և կենսաճարտարագիտության մեջ: Օրինակ, անասնաբուծության մեջ ֆերմենտները կարող են ավելացվել սննդամթերքի մեջ՝ բարձրացնելու կերային բաղադրիչների սննդային արժեքը, նվազեցնելու ծախսերն ու թափոնները, աջակցել կենդանիների աղիքների առողջությանը, բարելավել արտադրողականությունը և բարելավել շրջակա միջավայրը:

գենետիկ խմբագրում
գենետիկ խմբագրում

Բացի այդ, կաթնաթթվային բակտերիաները (LAB) երկար ժամանակօգտագործվել են ֆերմենտացված մթերքներ արտադրելու համար, իսկ վերջերս LAB-ն ստեղծվել է ամինաթթուների հաջորդականություն պարունակող ռեկոմբինանտ սպիտակուցների արտահայտման համար, որը կարող է լայնորեն օգտագործվել, օրինակ՝ մարդկանց, կենդանիների և սննդային մարսողությունը բարելավելու համար:

Սակայն այս նյութերն ունեն նաև սահմանափակումներ.

  1. Որոշ դեպքերում, ռեկոմբինանտ սպիտակուցների արտադրությունը բարդ է, ծախսատար և ժամանակատար:
  2. Բջիջներում արտադրվող նյութերը կարող են չհամընկնել բնական ձևերի հետ: Այս տարբերությունը կարող է նվազեցնել թերապևտիկ ռեկոմբինանտ սպիտակուցների արդյունավետությունը և նույնիսկ առաջացնել կողմնակի բարդություններ: Բացի այդ, այս տարբերությունը կարող է ազդել փորձերի արդյունքների վրա։
  3. Բոլոր ռեկոմբինանտ դեղամիջոցների հիմնական խնդիրը իմունոգենությունն է: Բոլոր կենսատեխնոլոգիական արտադրանքները կարող են դրսևորել իմունոգենության որոշակի ձև: Դժվար է կանխատեսել նոր բուժական սպիտակուցների անվտանգությունը։

Ընդհանուր առմամբ, կենսատեխնոլոգիայի առաջընթացը մեծացրել և հեշտացրել է ռեկոմբինանտ սպիտակուցների արտադրությունը տարբեր կիրառությունների համար: Թեև դրանք դեռևս ունեն որոշ թերություններ, նյութերը կարևոր նշանակություն ունեն բժշկության, հետազոտությունների և կենսատեխնոլոգիայի մեջ:

Հիվանդության հղում

ռեկոմբինանտ սպիտակուցը վնասակար չէ մարդկանց համար։ Դա ընդհանուր մոլեկուլի միայն անբաժանելի մասն է որոշակի դեղամիջոցի կամ սննդային տարրի մշակման մեջ: Բազմաթիվ բժշկական հետազոտություններ ցույց են տվել, որ գեր մկների լաբորատոր շտամում FGFBP3 սպիտակուցի (կրճատ՝ BP3) բռնի արտահայտումը ցույց է տվել նրանց մարմնի ճարպի զգալի նվազում:զանգվածը՝ չնայած օգտագործման գենետիկ նախատրամադրվածությանը։

Այս փորձարկումների արդյունքները ցույց են տալիս, որ FGFBP3 սպիտակուցը կարող է նոր թերապիա առաջարկել մետաբոլիկ համախտանիշի հետ կապված խանգարումների համար, ինչպիսիք են 2-րդ տիպի շաքարախտը և լյարդի ճարպային հիվանդությունը: Բայց քանի որ BP3-ը բնական սպիտակուց է և ոչ արհեստական դեղամիջոց, մարդկային ռեկոմբինանտ BP3-ի կլինիկական փորձարկումները կարող են սկսվել նախակլինիկական հետազոտությունների վերջին փուլից հետո: On, այսինքն՝ կան պատճառներ՝ կապված նման ուսումնասիրությունների անցկացման անվտանգության հետ։ Ռեկոմբինանտ սպիտակուցը մարդկանց համար վնասակար չէ իր փուլային մշակման և մաքրման շնորհիվ: Փոփոխություններ են տեղի ունենում նաև մոլեկուլային մակարդակում։

PD-L2-ը՝ իմունոթերապիայի հիմնական խաղացողներից մեկը, առաջադրվել է 2018 թվականի Նոբելյան մրցանակի ֆիզիոլոգիայի կամ բժշկության բնագավառում։ ԱՄՆ-ից պրոֆեսոր Ջեյմս Պ. Ալիսոնի և ճապոնացի պրոֆ. Տասուկու Հոնջոյի կողմից սկսված այս աշխատանքը հանգեցրել է այնպիսի քաղցկեղի բուժմանը, ինչպիսիք են մելանոման, թոքերի քաղցկեղը և այլն, որոնք հիմնված են անցակետային իմունոթերապիայի վրա: Վերջերս AMSBIO-ն իր իմունոթերապիայի շարքին ավելացրել է նոր հիմնական արտադրանք՝ PD-L2/TCR ակտիվացնողը՝ CHO Recombinant Cell Line:

Հայեցակարգի ապացուցման փորձերի ժամանակ Բիրմինգհեմի Ալաբամայի համալսարանի հետազոտողները՝ բժիշկ Հ. Լոնգ Ժենգի, պրոֆեսոր Ռոբերտ Բ. Ադամսի և UAB դպրոցի պաթոլոգիայի բաժանմունքի լաբորատոր բժշկության տնօրենի գլխավորությամբ: Բժշկությունը կարևորել է հազվագյուտ, բայց մահացու արյունահոսության խանգարման՝ TTP-ի հնարավոր թերապիան:

Սրա արդյունքներըուսումնասիրություններն առաջին անգամ ցույց են տալիս, որ rADAMTS13-ով բեռնված թրոմբոցիտների փոխներարկումը կարող է լինել նոր և պոտենցիալ արդյունավետ թերապևտիկ մոտեցում զարկերակային թրոմբոզի համար՝ կապված բնածին և իմունային միջնորդավորված TTP-ի հետ:

Ռեկոմբինանտ սպիտակուցը ոչ միայն սննդարար նյութ է, այլ նաև մշակվող դեղամիջոցի բաղադրության մեջ գտնվող դեղամիջոց։ Սրանք ընդամենը մի քանի ոլորտներ են, որոնք այժմ ներգրավված են բժշկության մեջ և կապված են նրա բոլոր կառուցվածքային տարրերի ուսումնասիրության հետ: Ինչպես ցույց է տալիս միջազգային պրակտիկան, նյութի կառուցվածքը մոլեկուլային մակարդակում հնարավորություն է տալիս հաղթահարել մարդու օրգանիզմի բազմաթիվ լուրջ խնդիրներ։

Պատվաստանյութի մշակում

Ռեկոմբինանտ սպիտակուցը մոլեկուլների հատուկ հավաքածու է, որը կարելի է մոդելավորել: Նմանատիպ հատկություն օգտագործվում է պատվաստանյութերի մշակման ժամանակ։ Պատվաստման նոր ռազմավարությունը, որը նաև հայտնի է որպես հատուկ ռեկոմբինանտ վիրուսի ներարկում, կարող է պաշտպանել վտանգի տակ գտնվող միլիոնավոր հավերին լուրջ շնչառական հիվանդություններից, ասում են Էդինբուրգի համալսարանի և Պիրբրայթ ինստիտուտի հետազոտողները: Այս պատվաստանյութերն օգտագործում են վիրուսի կամ բակտերիաի անվնաս կամ թույլ տարբերակներ՝ մանրէներ օրգանիզմի բջիջներ ներմուծելու համար: Այս դեպքում փորձագետները որպես պատվաստանյութ օգտագործել են ռեկոմբինանտ վիրուսներ տարբեր հասկ սպիտակուցներով՝ անվնաս վիրուսի երկու տարբերակ ստեղծելու համար: Այս կապի շուրջ կառուցված են բազմաթիվ տարբեր դեղամիջոցներ:

Բուժման նոր մոտեցում
Բուժման նոր մոտեցում

Ռեկոմբինանտ սպիտակուցի առևտրային անվանումները և անալոգները հետևյալն են՝

  1. «Ֆորտելիզին».
  2. «Զալտրապ».
  3. «Էյլեա».

Սրանք հիմնականում հակաքաղցկեղային դեղամիջոցներ են, սակայն կան բուժման այլ ոլորտներ, որոնք կապված են այս ակտիվ նյութի հետ:

Նոր պատվաստանյութը, որը նաև կոչվում է LASSARAB, որը նախատեսված է մարդկանց պաշտպանելու ինչպես Լասսա տենդից, այնպես էլ կատաղությունից, խոստումնալից արդյունքներ է ցույց տվել նախակլինիկական հետազոտություններում, ասվում է Nature Communications գիտական ամսագրում հրապարակված նոր հետազոտության մեջ: Անակտիվացված ռեկոմբինանտ պատվաստանյութի թեկնածուն օգտագործում է թուլացած կատաղության վիրուս:

Հետազոտական թիմը ներդրեց Lassa վիրուսի գենետիկական նյութը կատաղության վիրուսի վեկտորի մեջ, որպեսզի պատվաստանյութը արտահայտի մակերևութային սպիտակուցներ ինչպես Lassa-ում, այնպես էլ կատաղության բջիջներում: Այս մակերեսային միացությունները առաջացնում են իմունային պատասխան ինֆեկցիոն գործակալների դեմ: Այնուհետև այս պատվաստանյութն ապաակտիվացվեց՝ «ոչնչացնելու» կենդանի կատաղության վիրուսը, որն օգտագործվում էր կրիչի համար:

Ստանալու մեթոդներ

Գոյություն ունեն նյութի արտադրության մի քանի համակարգեր: Ռեկոմբինանտ սպիտակուցի ստացման ընդհանուր մեթոդը հիմնված է սինթեզից կենսաբանական նյութ ստանալու վրա։ Բայց կան այլ ուղիներ:

Ներկայումս կան հինգ հիմնական արտահայտչական համակարգեր.

  1. E. coli արտահայտման համակարգ.
  2. Yeast արտահայտման համակարգ.
  3. միջատների բջիջների արտահայտման համակարգ։
  4. Կաթնասունների բջիջների արտահայտման համակարգ։
  5. Առանց բջիջների սպիտակուցի արտահայտման համակարգ։

Վերջին տարբերակը հատկապես հարմար է տրանսմեմբրանային սպիտակուցների արտահայտման համարև թունավոր միացություններ: Վերջին տարիներին այն նյութերը, որոնք դժվար է արտահայտել սովորական ներբջջային մեթոդներով, հաջողությամբ ինտեգրվել են բջիջների մեջ in vitro: Բելառուսում լայնորեն կիրառվում է ռեկոմբինանտ սպիտակուցների արտադրությունը։ Այս հարցով զբաղվում են մի շարք պետական ձեռնարկություններ։

Cell Free Protein Synthesis System-ը թիրախային նյութերի սինթեզման արագ և արդյունավետ մեթոդ է բջջային էքստրակտների ֆերմենտային համակարգում տառադարձման և թարգմանության համար անհրաժեշտ տարբեր ենթաշերտերի և էներգիայի միացությունների ավելացման միջոցով: Վերջին տարիներին աստիճանաբար ի հայտ են եկել այնպիսի նյութերի տեսակների համար, ինչպիսիք են բարդ, թունավոր թաղանթները, առանց բջջային մեթոդների առավելությունները՝ ցույց տալով դրանց պոտենցիալ կիրառումը կենսադեղագործական ոլորտում:

Առանց բջիջների տեխնոլոգիան կարող է հեշտությամբ և վերահսկվող ձևով ավելացնել մի շարք ոչ բնական ամինաթթուներ՝ հասնելու բարդ փոփոխական գործընթացների, որոնք դժվար է լուծել սովորական ռեկոմբինանտ արտահայտությունից հետո: Նման մեթոդներն ունեն բարձր կիրառական արժեք և ներուժ դեղամիջոցների առաքման և պատվաստանյութերի մշակման համար՝ օգտագործելով վիրուսանման մասնիկներ: Մեծ քանակությամբ թաղանթային սպիտակուցներ հաջողությամբ արտահայտվել են ազատ բջիջներում:

Կոմպոզիցիաների արտահայտություն

Ռեկոմբինանտ սպիտակուցը CFP10-ESAT 6 արտադրվում և օգտագործվում է պատվաստանյութեր ստեղծելու համար: Նման տուբերկուլյոզի ալերգենը թույլ է տալիս ամրապնդել իմունային համակարգը և զարգացնել հակամարմիններ: Ընդհանուր առմամբ, մոլեկուլային ուսումնասիրությունները ներառում են սպիտակուցի ցանկացած ասպեկտի ուսումնասիրություն, ինչպիսիք են կառուցվածքը, գործառույթը, փոփոխությունները, տեղայնացումը կամ փոխազդեցությունները: Հետազոտելու համարինչպես են հատուկ նյութերը կարգավորում ներքին գործընթացները, հետազոտողները սովորաբար միջոցներ են պահանջում՝ ստեղծելու հետաքրքրություն և օգուտ ֆունկցիոնալ միացություններ:

Պատվաստանյութերի ստեղծում
Պատվաստանյութերի ստեղծում

Հաշվի առնելով սպիտակուցների չափն ու բարդությունը՝ քիմիական սինթեզը այս նախաձեռնության համար կենսունակ տարբերակ չէ: Փոխարենը, կենդանի բջիջները և նրանց բջջային մեքենաները սովորաբար օգտագործվում են որպես գործարաններ՝ տրամադրված գենետիկական կաղապարների հիման վրա նյութեր ստեղծելու և կառուցելու համար: Այնուհետև ռեկոմբինանտ սպիտակուցի արտահայտման համակարգը ստեղծում է դեղամիջոց ստեղծելու համար անհրաժեշտ կառուցվածքը: Հաջորդը գալիս է տարբեր կատեգորիաների դեղերի համար անհրաժեշտ նյութի ընտրությունը։

Ի տարբերություն սպիտակուցների, ԴՆԹ-ն հեշտ է կառուցել սինթետիկ կամ in vitro՝ օգտագործելով լավ հաստատված ռեկոմբինանտ տեխնիկան: Հետևաբար, հատուկ գեների ԴՆԹ-ի ձևանմուշները՝ ավելացված ռեպորտաժային հաջորդականություններով կամ հարակից պիտակների հաջորդականությամբ կամ առանց դրանց, կարող են նախագծվել որպես մոնիտորինգվող նյութի արտահայտման ձևանմուշներ: ԴՆԹ-ի նման ձևանմուշներից ստացված նման միացությունները կոչվում են ռեկոմբինանտ սպիտակուցներ։

Նյութի արտահայտման ավանդական ռազմավարությունները ներառում են բջիջների փոխակերպումը ԴՆԹ-ի վեկտորով, որը պարունակում է ձևանմուշ, և այնուհետև բջիջների մշակումը՝ ցանկալի սպիտակուցը արտագրելու և թարգմանելու համար: Որպես կանոն, բջիջներն այնուհետև ենթարկվում են լիզերի, որպեսզի արդյունահանվեն արտահայտված միացությունը՝ հետագա մաքրման համար: CFP10-ESAT6 ռեկոմբինանտ սպիտակուցը մշակվում է այս կերպ և անցնում է հնարավոր մաքրման համակարգով:տոքսինների ձևավորում. Միայն դրանից հետո այն սինթեզվում է պատվաստանյութի։

Մոլեկուլային նյութերի և՛ պրոկարիոտային, և՛ էուկարիոտային in vivo արտահայտման համակարգերը լայնորեն կիրառվում են: Համակարգի ընտրությունը կախված է սպիտակուցի տեսակից, ֆունկցիոնալ ակտիվության պահանջից և ցանկալի բերքատվությունից։ Արտահայտման այս համակարգերը ներառում են կաթնասուններ, միջատներ, խմորիչներ, բակտերիաներ, ջրիմուռներ և բջիջներ: Յուրաքանչյուր համակարգ ունի իր առավելություններն ու մարտահրավերները, և կոնկրետ կիրառման համար ճիշտ համակարգի ընտրությունը կարևոր է դիտարկվող նյութի հաջող արտահայտման համար:

Արտահայտություն կաթնասուններից

Ռեկոմբինանտ սպիտակուցների օգտագործումը թույլ է տալիս մշակել տարբեր մակարդակի պատվաստանյութեր և դեղամիջոցներ: Դրա համար կարող է օգտագործվել նյութ ստանալու այս մեթոդը։ Կաթնասունների արտահայտման համակարգերը կարող են օգտագործվել կենդանական թագավորությունից սպիտակուցներ արտադրելու համար, որոնք ունեն առավել բնիկ կառուցվածք և ակտիվություն՝ իրենց ֆիզիոլոգիապես համապատասխան միջավայրի շնորհիվ: Սա հանգեցնում է հետթարգմանական մշակման և ֆունկցիոնալ գործունեության բարձր մակարդակների: Կաթնասունների արտահայտման համակարգերը կարող են օգտագործվել հակամարմիններ, բարդ սպիտակուցներ և միացություններ արտադրելու համար՝ բջիջների վրա հիմնված ֆունկցիոնալ վերլուծություններում օգտագործելու համար: Այնուամենայնիվ, այս առավելությունները զուգորդվում են մշակութային ավելի խիստ պայմաններով:

Կաթնասունների արտահայտման համակարգերը կարող են օգտագործվել սպիտակուցներ առաջացնելու համար ժամանակավոր կամ կայուն բջջային գծերի միջոցով, որտեղ արտահայտման կառուցվածքը ինտեգրված է հյուրընկալող գենոմում: Թեև նման համակարգերը կարող են օգտագործվել բազմաթիվ փորձերի ժամանակ, ժամանակըարտադրությունը կարող է մեծ քանակությամբ նյութ առաջացնել մեկից երկու շաբաթվա ընթացքում: Այս տեսակի ռեկոմբինանտ սպիտակուցային կենսատեխնոլոգիան մեծ պահանջարկ ունի:

Կաթնասունների արտահայտման այս անցողիկ, բարձր բերքատվության համակարգերը օգտագործում են կասեցման կուլտուրաներ և կարող են գրամներ բերել մեկ լիտրում: Բացի այդ, այս սպիտակուցներն ունեն ավելի շատ բնածին ծալվող և հետթարգմանական փոփոխություններ, ինչպիսիք են գլիկոզիլացումը, համեմատած արտահայտման այլ համակարգերի հետ:

միջատների արտահայտություն

Ռեկոմբինանտ սպիտակուցի արտադրության մեթոդները չեն սահմանափակվում միայն կաթնասուններով: Կան նաև արտադրական ծախսերի առումով ավելի արդյունավետ եղանակներ, թեև 1 լիտր մշակված հեղուկի համար նյութի բերքատվությունը շատ ավելի ցածր է։

Կլինիկական փորձարկումներ
Կլինիկական փորձարկումներ

Միջատների բջիջները կարող են օգտագործվել կաթնասունների համակարգերի նման փոփոխություններով բարձր մակարդակի սպիտակուց արտահայտելու համար: Կան մի քանի համակարգեր, որոնք կարող են օգտագործվել ռեկոմբինանտ բակուլովիրուս ստեղծելու համար, որոնք այնուհետև կարող են օգտագործվել միջատների բջիջներում հետաքրքրող նյութ հանելու համար:

Ռեկոմբինանտ սպիտակուցների արտահայտությունները հեշտությամբ կարող են մեծացվել և հարմարեցնել բարձր խտության կասեցման մշակույթին մոլեկուլների լայնածավալ բաղադրության համար: Նրանք ֆունկցիոնալ առումով ավելի նման են կաթնասունների նյութի բնիկ կազմին: Թեև բերքատվությունը կարող է լինել մինչև 500 մգ/լ, ռեկոմբինանտ բակուլովիրուսի արտադրությունը կարող է ժամանակատար լինել, և կուլտուրայի պայմաններն ավելի բարդ են, քան պրոկարիոտային համակարգերը: Այնուամենայնիվ, ավելի հարավային և տաք երկրներում նմանօրինակմեթոդը համարվում է ավելի արդյունավետ։

Բակտերիալ արտահայտություն

Ռեկոմբինանտ սպիտակուցների արտադրությունը կարելի է հաստատել բակտերիաների օգնությամբ։ Այս տեխնոլոգիան շատ տարբեր է վերը նկարագրվածներից: Բակտերիալ սպիտակուցային արտահայտման համակարգերը հայտնի են, քանի որ բակտերիաները հեշտ են մշակվում, արագ են զարգանում և տալիս են ռեկոմբինանտ ձևակերպման բարձր բերքատվություն: Այնուամենայնիվ, բակտերիաներում արտահայտված բազմադոմեյն էուկարիոտիկ նյութերը հաճախ ոչ ֆունկցիոնալ են, քանի որ բջիջները սարքավորված չեն անհրաժեշտ հետթարգմանական փոփոխությունները կամ մոլեկուլային ծալումը կատարելու համար:

Բացի այդ, շատ սպիտակուցներ դառնում են անլուծելի որպես ներառական մոլեկուլներ, որոնք շատ դժվար է վերականգնել առանց կոշտ դենատուրատորների և հետագա ծանր մոլեկուլային վերալիցքավորման ընթացակարգերի: Այս մեթոդը հիմնականում համարվում է հիմնականում փորձնական:

Բջջային ազատ արտահայտություն

Ստաֆիլոկինազի ամինաթթուների հաջորդականությունը պարունակող ռեկոմբինանտ սպիտակուցը ստացվում է մի փոքր այլ կերպ։ Այն ներառված է բազմաթիվ տեսակի ներարկումների մեջ, որոնց օգտագործումը պահանջում է մի քանի համակարգեր:

Բջջից ազատ սպիտակուցի արտահայտությունը նյութի in vitro սինթեզ է՝ օգտագործելով թարգմանաբար համատեղելի ամբողջական բջիջների քաղվածքներ: Սկզբունքորեն, ամբողջ բջիջների քաղվածքները պարունակում են բոլոր մակրոմոլեկուլները և բաղադրիչները, որոնք անհրաժեշտ են տառադարձման, թարգմանության և նույնիսկ հետթարգմանական փոփոխության համար:

Այս բաղադրիչները ներառում են ՌՆԹ պոլիմերազ, կարգավորող սպիտակուցային գործոններ, տրանսկրիպցիոն ձևեր, ռիբոսոմներ և tRNA: Ավելացնելիսկոֆակտորներ, նուկլեոտիդներ և գենի հատուկ ձևանմուշ, այս քաղվածքները կարող են սինթեզել հետաքրքրող սպիտակուցները մի քանի ժամում:

Թեև կայուն չէ լայնածավալ արտադրության համար, առանց բջջային կամ in vitro սպիտակուցի արտահայտման (IVT) համակարգերն առաջարկում են մի շարք առավելություններ սովորական in vivo համակարգերի համեմատ:

Առանց բջիջների արտահայտությունը թույլ է տալիս ռեկոմբինանտ ձևակերպումների արագ սինթեզ՝ առանց բջիջների կուլտուրա ներգրավելու: Բջջազուրկ համակարգերը հնարավորություն են տալիս պիտակավորել սպիտակուցները փոփոխված ամինաթթուներով, ինչպես նաև արտահայտել միացություններ, որոնք արագ պրոտեոլիտիկ քայքայվում են ներբջջային պրոտեազների կողմից։ Բացի այդ, ավելի հեշտ է միևնույն ժամանակ արտահայտել բազմաթիվ տարբեր սպիտակուցներ՝ օգտագործելով առանց բջիջների մեթոդը (օրինակ՝ սպիտակուցի մուտացիաների փորձարկում փոքր մասշտաբով արտահայտման միջոցով բազմաթիվ տարբեր ռեկոմբինանտ ԴՆԹ կաղապարներից): Այս ներկայացուցչական փորձի ժամանակ IVT համակարգը օգտագործվել է մարդկային կասպազ-3 սպիտակուցն արտահայտելու համար:

Եզրակացություններ և ապագա հեռանկարներ

Ռեկոմբինանտ սպիտակուցի արտադրությունն այժմ կարելի է դիտարկել որպես հասուն կարգապահություն: Սա մաքրման և վերլուծության բազմաթիվ աստիճանական բարելավումների արդյունք է: Ներկայումս դեղերի հայտնաբերման ծրագրերը հազվադեպ են դադարեցվում թիրախային սպիտակուցը արտադրելու անկարողության պատճառով: Մի քանի ռեկոմբինանտ նյութերի արտահայտման, մաքրման և վերլուծության զուգահեռ գործընթացներն այժմ լավ հայտնի են աշխարհի շատ լաբորատորիաներում:

բնական բաղադրիչներ
բնական բաղադրիչներ

Սպիտակուցային բարդույթներ և աճող հաջողություններ պատրաստելու գործումլուծվող թաղանթային կառուցվածքները կպահանջեն ավելի շատ փոփոխություններ՝ պահանջարկին համապատասխանելու համար: Սպիտակուցների ավելի կանոնավոր մատակարարման համար արդյունավետ պայմանագրային հետազոտական կազմակերպությունների ի հայտ գալը թույլ կտա վերաբաշխել գիտական ռեսուրսները՝ այս նոր մարտահրավերներին դիմակայելու համար:

Բացի այդ, զուգահեռ աշխատանքային հոսքերը պետք է թույլ տան ստեղծել մշտադիտարկվող նյութի ամբողջական գրադարաններ, որոնք հնարավորություն կտան նոր թիրախների նույնականացում և առաջադեմ զննում, ինչպես նաև փոքր մոլեկուլային դեղամիջոցների հայտնաբերման ավանդական նախագծերը:

Խորհուրդ ենք տալիս: