Բակտերիալ վարակների բազմազանությունը պահանջում է պաթոգենների հստակ նույնականացում և նրա տեսակների սահմանումը: Միկրոօրգանիզմի տեսակը որոշելու համար մանրէաբաններին օգնում են նրա երանգային հատկությունները՝ մանրէի զգայունությունը տարբեր ներկանյութերով ներկելու համար։ Այս մեթոդը թույլ է տալիս ուսումնասիրել հարուցչի մորֆոլոգիան: Մանրէաբանության ոլորտում գործնական և տեսական հետազոտությունների համար մեծ նշանակություն ունեն մանրէների թուրմային հատկությունները։
Մանրէաբանական հետազոտություն
Մանրէաբանության մեջ կան միկրոօրգանիզմների ներկման բազմաթիվ մեթոդներ: Դրանք բոլորը հիմնված են բակտերիաների թուրմային հատկությունների վրա։ Գունավորումը թույլ է տալիս որոշել դրանց ձևը, կառուցվածքը, չափը, հարաբերական դիրքը: Սա թույլ է տալիս լուծել ընդհանուր կենսաբանության և համեմատական մանրէաբանության միկրոօրգանիզմների տեսակների համակարգման խնդիրները։
Ինչու նկարել դրանք
Բակտերիաները գործնականումթափանցիկ օրգանիզմներ, և առանց ներկման, դրանք վատ տեսանելի են սովորական մանրադիտակի համար: Առարկաները ուսումնասիրելու համար կարող եք օգտագործել մանրադիտակի հատուկ տեսակներ (ֆազային հակադրություն, մութ դաշտ), բայց ամենահեշտ ձևը ներկելն է, որից հետո բակտերիաները տեսանելի են դառնում սովորական լուսային մանրադիտակով։
Նմուշի պատրաստում
Անկախ օգտագործվող ներկման տեխնիկայից, ուսումնասիրվող օբյեկտը պատրաստելու միասնական կանոններ կան: Հետևյալ փուլերը պարտադիր են՝
- Ստերիլ գործիքները քսում են ապակե սլայդի վրա:
- Նմուշը չորանում է։ Դա արվում է սենյակային ջերմաստիճանում կամ չորացման պահարանների միջոցով:
- Հաջորդում է ֆիքսման փուլը՝ միկրոօրգանիզմները հատուկ միացություններով ամրացվում են ապակու վրա։
- Պատշաճ ներկում. նմուշը որոշակի ժամանակահատվածով ծածկվում է ներկով, որից հետո այն լվանում է։
- Վերջնական չորացում. նմուշը նորից չորանում է:
Ամենատարածված ներկանյութեր
Ամենից հաճախ օգտագործվող ներկանյութերը հիմնված են անիլինի վրա՝ տարբեր թթվային արժեքներով (pH): Ներկանյութերի մեծ մասը փոշիներ են, որոնք նոսրացված են սպիրտով։
Ներկանյութերը, որոնցում կատիոնները գունավորող նյութեր են, կոչվում են հիմնական (7-ից բարձր pH): Դրանք կարող են օգտագործվել միկրոօրգանիզմներին կարմիր (մագենտա, սաֆրանին), մանուշակագույն (մեթիլմանուշակ, թիոնին), կապույտ (մեթիլեն կապույտ), կանաչ (մալաքիտ կանաչ), շագանակագույն (քրիզոիդին) և սև (ինդուլին) ներկելու համար:
Ներկանյութերը, որոնցում ներկանյութերը անիոններ են, կոչվում են թթվային (pH 7-ից պակաս): Նրանք նմուշը ներկելու են կարմիր (էոզին), դեղին (պիկրին) կամ սև (նիգրոսին):
Գոյություն ունի չեզոք ներկանյութերի խումբ (օրինակ՝ ռոդամին B), որտեղ և՛ կատիոնները, և՛ անիոնները գործում են որպես ներկանյութեր։
Մշակույթ մեռած, թե կենդանի
Գունավորման մեթոդները բաժանվում են երկու խմբի՝ ըստ փորձանմուշի կյանքի ձևի:
- Կենսական (ցմահ) ներկում: Միկրոօրգանիզմների հատկությունների ուսումնասիրման այս մեթոդը կիրառվում է կենդանի հյուսվածքների ուսումնասիրության ժամանակ, ինչը հնարավորություն է տալիս դիտարկել մանրէների կենսական գործընթացները։ Այս ներկման համար օգտագործվում են ցածր թունավորությամբ և բարձր թափանցող հզորությամբ ներկանյութեր։
- Հետվիտալ ներկում. Սա մահացած կամ սպանված միկրոօրգանիզմների ներկումն է: Բակտերիաների թուրմային հատկությունների շնորհիվ մանրէաբանները որոշում են դրանց կառուցվածքը։ Հենց այս ներկումն է առավել լայնորեն կիրառվում։
Գրամ-դրական և գրամ-բացասական
Հենց բակտերիաների այս հատկանիշները կարելի է գտնել տարբեր դեղամիջոցների ցուցումներում: Բակտերիաների թուրմային հատկությունների ուսումնասիրման այս մեթոդը հիմնված է գենտյան մանուշակագույն ներկի և յոդի ֆիքսացիայի օգտագործման վրա։ Սա դանիացի բժիշկ Հանս Քրիստիան Գրամի տեխնիկան է, ով այն առաջարկել է 1884 թվականին: Այս ներկման արդյունքում բակտերիաները բաժանվում են երկու խմբի՝
- Գրամ (+) - դառնալ կապույտ(ստաֆիլոկոկներ և streptococci).
- գրամ (-) - ներկել վարդագույնից կարմիր (էնտերոբակտերիաներ, սալմոնելա, E. coli):
Գունավորման տարբեր արդյունքները պայմանավորված են բակտերիաների պատերի տարբեր երանգային հատկություններով: Գրամ ներկերի մեթոդը դեռևս գլխավորն է որոշ վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման մեջ։
Գունավորման այլ տեխնիկա
Բնութագրենք մանրէաբանության մեջ լայնորեն կիրառվող ևս մի քանի մեթոդներ։
- Ziehl-Nelson մեթոդ - որոշում է բակտերիաների թթվային դիմադրությունը: Այն բացահայտում է տուբերկուլյոզի և միկոբակտերիոզի հարուցիչները։
- Ռոմանովսկի-Գիմսա տեխնիկան - ներկում է թթվային (քացախաթթու և կաթնաթթու) բակտերիաները կարմիր, և բազոֆիլ (սպիրոխետներ և նախակենդանիներ) կապույտ:
- Մորոզովի տեխնիկան. բակտերիաները ներկում են շագանակագույն գույնով և տեսանելի դարձնում դրանց դրոշակները:
Սպորները կարելի է տեսնել
Tsiel's fuchcin ներկումը թույլ է տալիս տեսնել բակտերիաների սպորները: Ներկվելուց հետո ունենալով վարդագույն գույն՝ դրանք հստակ երևում են կապույտ բակտերիաների ֆոնին։ Այս մեթոդը նաև մանրէաբանության գործիք է և ունի գործնական մեծ նշանակություն։
