Էնտերոբակտերիաների և որոշ վիբրիոների դիֆերենցիալ որոշման մեջ առանձնահատուկ տեղ է գրավում Voges-Proskauer ռեակցիան։ Թեստը հիմնված է բակտերիաների՝ գլյուկոզայի խմորման ունակության վրա՝ ացետոին ձևավորելու համար:
Հետազոտական գործընթացի էությունը
Մանրէաբանության մեջ Voges-Proskauer ռեակցիան հաճախ օգտագործվում է Yersinia ընտանիքի էնտերոբակտերիաների (ներառյալ պսեւդոտուբերկուլյոզի և էնտերոկոլիտի պաթոգենները), Escherichia coli-ի և սպորներ առաջացնող աերոբները տարբերակելու համար: Արդյունքը տեսանելի է` ներկելով միջավայրը, երբ ավելացվում են որոշակի ռեակտիվներ:
Այս թեստը պատկանում է IMViC շարքին (Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate հապավումը) - նույնականացման թեստերի խումբ, ներառյալ դիֆերենցիալ սահմանումները.
- ինդոլով, հիմնված տրիպտոֆանի ինդոլի տրոհման վրա, որն օգտագործվում է Kovacs կամ Ehrlich ռեագենտի առկայության դեպքում;
- օգտագործումմեթիլռոտ կամ մեթիլ կարմիր, որը հայտնաբերում է որոշակի pH գլյուկոզայի նյութափոխանակության արդյունքում;
- Voges-Proskauer ռեակցիաներ ացետիլ-մեթիլկարբինոլի հայտնաբերման համար;
- ցիտրատի օգտագործումը գունային փոփոխությամբ միջավայրի ալկալացման արդյունքում:
Գործընթացի էությունը ախտորոշված բակտերիաների առկայության վիզուալացումն է՝ թթվածնի առկայության դեպքում նրանց կողմից ձևավորված ացետոինի և կաուստիկ պոտաշի փոխազդեցության շնորհիվ: Ացետիլ-մեթիլկարբինոլը օքսիդացվում է դիացետիլի, որը ձևավորում է վառ կարմիր կամ վարդագույն միացություն։ Բարձրացրեք թեստի զգայունությունը՝ ներմուծելով ալֆա-նաֆթոլ նախքան կաուստիկ պոտաշ ավելացնելը:
Թեստային կարգավորում
Վոգես-Պրոսկաուեր ռեակցիայի ձևակերպումը ներառում է միկրոօրգանիզմների նախնական աճեցում: Քլարկի դիֆերենցիալ ախտորոշիչ միջավայրի վրա ցանում են մաքուր կուլտուրա, որի տարբերակն է Կլարկի արգանակը (առանց ագար-ագարի ավելացման)։ Կամ օգտագործվում է պատրաստի միջոց, կամ պատրաստվում է ինքնուրույն։ Բաղադրիչները ներառում են՝
- 5գ պեպտոն;
- 5գ գլյուկոզա;
- 5գ երկհիմնական կալիումի ֆոսֆատ;
- 1L թորում.
Ուսումնասիրության ընթացքում մշակույթը պատվաստվում է ստերիլ մանրէաբանական օղակով հեղուկ միջավայրում: Քանակը - 5 մլ փորձանոթում գումարած կոնտրոլ: Ինկուբացիան իրականացվում է 35-37 աստիճան ջերմաստիճանում երկու օր շարունակ։ Հաջորդը, Voges-Proskauer ռեակցիայի ուսումնասիրությունն իրականացվում է փուլերով՝
- 2, 5 մլ արգանակի մշակույթը տեղափոխվում է ստերիլ խողովակ:
- Ավելացրեք վեց կաթիլ ալֆա-նաֆթոլ (5% ալկոհոլային լուծույթ):
- Ավելացնել 40%կաուստիկ կալիումի լուծույթ 0,1 մլ կամ երկու կաթիլ քանակությամբ։
- Խառնում է փորձանոթը թեթև թափահարելով։
- Գնահատեք արդյունքը փորձի մեկնարկից 15 րոպե հետո:
Փորձարկման այլընտրանքային մեթոդը գիշերային ինկուբացիան է, որի ժամանակը կրճատվում է մինչև 18 ժամ կամ մինչև մեկ օր: Ի լրումն այս մեթոդի, օգտագործվում է նաև էքսպրես թեստ. կուլտուրան 2 մլ միջավայրում ներմուծում են օղակաձև, ինկուբացնում մոտ չորս ժամ, այնուհետև ռեակտիվները ավելացնում են հավասար քանակությամբ 2-3 կաթիլ, խառնում և խառնում։ արդյունքը գնահատվում է տասը րոպե անց։
Վերահսկիչը թոքաբորբի հարուցիչներից մեկն է Klebsiella pneumoniae - շտամ atcc 13883:
Արդյունքի գնահատում
Ռեագենտները ավելացնելուց հետո պահանջվող ժամանակից հետո (5-ից 15 րոպե) պետք է նկատվի բալի-կարմիր գույն՝ ընդգծված դրական ռեակցիայով, կարմիր և վարդագույնը՝ թույլ դրական ռեակցիայով։ Ոչ մի փոփոխություն չի գրանցվել որպես բացասական արդյունք:
Կծու պոտաշի ավելցուկը լուծույթում կարող է տալ դրական ռեակցիայի իմիտացիա՝ ներկվելով պղնձի գույնով։ Այս դեպքում պետք է արձանագրվի փորձարկված գաղութի բացասական արձագանքը։ Նաև պղնձի ներկումը հայտնվում է այն դեպքերում, երբ գնահատումը տրվում է ռեակտիվների ներմուծումից մեկ ժամ անց:
Արդյունքը գնահատելիս պետք է հաշվի առնել, որ ուսումնասիրված միկրոօրգանիզմների երկարատև աճեցումը (ավելի քան երեք օր) հանգեցնում է միջավայրի թթվացմանը, ինչը կարող է հանգեցնել հետազոտության ոչ ճիշտ ելքի։ Արձագանքը կարող է լինել մեղմ դրական կամկեղծ բացասական։
Պահանջներ փորձարկման ռեակտիվներին
Voges-Proskauer ռեագենտները պետք է համապատասխանեն այնպիսի պահանջներին, ինչպիսիք են ճիշտ կոնցենտրացիան, բարձր մաքրությունը և կայունությունը, ինչը ձեռք է բերվում պատշաճ պահպանման միջոցով:
Օգտագործման պատրաստ փորձարկման փաթեթները սովորաբար պարունակում են ռեակտիվներ 100 կամ ավելի օգտագործման համար և տրվում են պլաստիկ կամ ներկված ապակյա սրվակներով: Որակը կարգավորվում է համապատասխան փաստաթղթերով։
