Գրամի բիծը լայնորեն կիրառվում է մանրէաբանության մեջ, քանի որ այն բակտերիաները տարբերելու ամենահեշտ միջոցներից մեկն է՝ հիմնվելով նրանց բջջային պատի կազմի վրա: Ըստ Gram-ի, բոլոր բակտերիաները կարելի է բաժանել գրամ դրական (Գրամ (+)) և գրամ-բացասական (Գրամ (-)): Գրամ ներկերի մեթոդը մշակվել է 1884 թվականին և դրանից հետո չի կորցրել իր ժողովրդականությունը, չնայած այն մի քանի անգամ փոփոխվել է։
Բջջային պատի կառուցվածք
Գամ ներկելը ցույց է տալիս՝ բակտերիան գրամ դրական է, թե գրամ-բացասական: Բակտերիաների բաժանումը գրամ (+) և գրամ (-)-ի կատարվում է նրանց բջջային պատի կառուցվածքին համապատասխան։
Բջջային պատը պարունակում է ամենամեծ քանակությամբ պեպտիդոգլիկան (մուրեին)՝ բարդ նյութ, որը ներառում է պեպտապեպտիդ և գլիկան: Գլիկանը բաղկացած է N-ացետիլգլյուկոզամինի և N-ացետիլմուրամաթթվի փոխարինող մնացորդներից, որոնք միմյանց հետ կապված են β-1-ով,4-գլիկոզիդային կապեր. Պեպտիդոգլիկանը ապահովում է բջիջների ձևի պահպանում, օսմոտիկ պաշտպանություն և հակագենային գործառույթներ:
Հիմնական տարբերությունները գրամ-դրական և գրամ-բացասական բակտերիաների միջև
Տարբեր բակտերիաներ ունեն տարբեր պեպտիդոգլիկանի շերտի հաստություն: Բակտերիաներում, որոնք դասակարգվում են որպես գրամ դրական, այն տատանվում է 15-ից 80 նմ, իսկ գրամ-բացասականների դեպքում՝ 2-ից 8 նմ: Միաժամանակ, գրամ-բացասական բակտերիաները պեպտիդոգլիկան շերտի տակ ունեն հատուկ կառուցվածք, որը չունեն Գրամ դրական բակտերիաները՝ պերիպլազմային տարածությունը։ Այս տարածությունը լցված է հիդրոլիտիկ ֆերմենտներով՝ β-լակտամազ, ռիբոնուկլեազ 1, ֆոսֆատազ։ Հենց այս ֆերմենտներն են պատասխանատու գրամ-բացասական բակտերիաների դիմադրողականության համար շատ հակաբիոտիկների նկատմամբ:
Բակտերիաների Gram(-) պեպտիդոգլիկան շերտը կապված է լիպոպոլիսաքարիդին՝ էնդոտոքսին պարունակող հակագենային կառուցվածքին: Գրամ(+) բակտերիաներում տեյխոյաթթուները կատարում են նմանատիպ գործառույթներ։
Գրամ-բացասական բակտերիաներն ունեն լրացուցիչ կառուցվածք՝ արտաքին թաղանթ։
Գունավորման մեթոդի էությունը
Նախքան ներկումը սկսելը պատրաստում են ուսումնասիրված բակտերիաների քսուկներ։ Դա անելու համար ջուրը կաթում են ապակե սլայդի վրա և այնտեղ միկրոօրգանիզմների մշակույթ ավելացվում է բակտերիալ օղակով: Այնուհետև, ջուրն ամբողջությամբ չորացնելուց հետո, քսուքը ամրացվում է. ապակու սլայդը մի քանի անգամ տեղափոխվում է այրիչի բոցի վրայով: Գրամ գունավորումն ավելի արդյունավետ է, քան կենդանի բակտերիաների ներկումը. ներկի մոլեկուլներն ավելի լավ են կապվում մահացած բջիջների հետ:
Գունավորումը կատարվում է մի քանի փուլով.
- Փոքր ֆիլտր թղթի կտորները դրվում են ֆիքսված քսուքի վրա և լցնում հիմնական ներկը՝ գենդիանուշակագույն կամ մեթիլեն կապույտ։
- 3-5 րոպե հետո հանեք գունավոր ֆիլտր թուղթը և քսուքը լցրեք Լուգոլի լուծույթով 1 րոպե։ Այս դեպքում պատրաստուկը մթնում է։
- Լուգոլի լուծույթը քամվում է և քսուքը մշակվում է մաքուր էթիլային սպիրտով. մի քանի կաթիլ կաթում են պատրաստուկի վրա և քամում են 20 վայրկյան հետո: Պրոցեդուրան կրկնվում է 2-3 անգամ։
- Լվացեք թեստի սլայդը թորած ջրով:
- Արտադրել հավելյալ գունաթափում. պատրաստումը ավարտել ֆուկսինով: 1-2 րոպե հետո ներկը լվանում են։
- Ջուրը չորանալուց հետո մանրադիտակի տակ զննեք քսուքը։ Գրամ դրական բակտերիաները կլինեն կապույտ-մանուշակագույն, գրամ-բացասական բակտերիաները կլինեն վարդագույն կամ կարմիր:
Գունավորման տարբեր ձևերի պատճառները
Ինչպես նկարագրված է վերևում, բակտերիաների գրամ ներկումը գունավորում է գրամ դրական բակտերիաները կապույտ-մանուշակագույն, մինչդեռ գրամ-բացասական բակտերիաները ներկվում են կարմիր կամ վարդագույն: Այս մեթոդով բակտերիաների դիֆերենցիալ ներկման պատճառն այն է, որ գենտյան մանուշակի լուծվող ձևը բջիջ մտնելուց հետո ներկը անցնում է չլուծվող յոդի ձևի։ Էթիլային սպիրտով բակտերիաների բուժման ժամանակ այս ոչ բևեռային լուծիչի ազդեցությամբ թաղանթից արդյունահանվում են լիպիդներ։ Այնուհետև թաղանթը դառնում է ծակոտկեն և այլևս էական խոչընդոտ չէ ներկերի տարրալվացման համար: ԱյնուամենայնիվՊեպտիդոգլիկանը ավելի դիմացկուն է ոչ բևեռային լուծիչների, այդ թվում՝ ալկոհոլի նկատմամբ: Հենց նա է կանխում ներկի լվացումը, ուստի խիտ մուրեինային շերտով բակտերիաները դառնում են կապույտ-մանուշակագույն (գրամ դրական), իսկ ալկոհոլով բուժումից հետո դրանք չեն փոխում իրենց գույնը։
Գրամ-բացասական բակտերիաների բարակ մուրեինային շերտը չի կարող պահել ներկի մոլեկուլները բջջում, ուստի ալկոհոլի ազդեցությունից հետո դրանք դառնում են անգույն՝ ներկված գրամ-բացասական:
Ֆուքսինի քսուքի ներթափանցումից հետո գրամ ներկված բակտերիաները մնում են կապույտ-մանուշակագույն, մինչդեռ գրամ-բացասական բակտերիաները դառնում են վարդագույն-կարմիր:
Գրամ(+) և գրամ(-) բակտերիաների օրինակներ
Գրամ-բացասական բակտերիաները ներառում են ցիանոբակտերիաներ, ծծմբային բակտերիաներ, երկաթի բակտերիաներ, քլամիդիա, ռիկեցիա, քացախային բակտերիաներ, շատ մեթիլոբակտերիաներ, թիոնային բակտերիաներ, արսենիտոբակտերիաներ, կարբոքսիբակտերիաներ:
Բիֆիդոբակտերիաները, շատ ջրային բակտերիաներ, streptococci և staphylococci գրամ-դրական են:
